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服务
BioID是一种基于邻近依赖生物素化BioID资源筛选候选蛋白质-蛋白质相互作用的新方法。
核心将在以下方面提供协助:
- 项目设计
- bioid融合蛋白的检测
- 生物融合蛋白表达细胞的建立与检测
- 大规模生物id下拉
- 安排用质谱法鉴定候选人
- 数据分析
设备
- Agilent 7890A气相色谱仪
- 安捷伦5977B质谱系统
- Luminex 200多重蛋白质分析系统
- Nicoya OpenSPR(表面等离子体共振)
- Bio-Rad ChemiDoc MP成像仪
- LiCor奥德赛Fc成像仪
- BioTek Cytation 3细胞成像多模式阅读器
出版物
- May DG, Scott KL, Campos AR, Roux KJ。BioID和TurboID在蛋白质近距离生物素化中的比较应用。细胞.2020; 9 (5): E1070。2020年4月25日发布。PMID:32344865
- Sears RM, May DG, Roux KJ。BioID作为活细胞中蛋白质接近标记的工具。方法Mol Biol.2019; 2012:299还是313。PMID:31161514
- 祝DG, Roux KJ。生物id:一种生成蛋白质关联历史的方法.方法Mol Biol.2019; 2008:83还是95。PMID:31124090
- 侯赛因年代,Bedekovics T,刘问,胡女士,全H,约翰逊SH,Vasmatzis G,可能DG,Roux KJ,Galardy PJ.UCH-L1绕过mTOR促进蛋白质生物合成,是小鼠myc驱动的淋巴瘤所必需的。血。2018年12月13日;132(24):2564-2574。
- Brudvig JJ,该隐JT,Schmidt-Grimminger GG,Stumpo DJ,Roux KJ,Blackshear PJ,魏玛JM.MARCKS是Netrin-DCC信号传递和胼胝体形成的必要条件。摩尔一般。2018年11月,55(11):8388 - 8402。
- Roux KJ,金正日迪,伯克B,可能DG.BioID:蛋白质-蛋白质相互作用的筛选。Curr Protoc Protein科学2018年2月21日;91:19.23.1-19.23.15。
- 比兰德拉Kc,可能DG,本森BV,金正日迪,Shivega工作组,阿里MH,Faustino RS,坎波斯基于“增大化现实”技术,Roux KJ.VRK2A是一种a型层蛋白依赖性核膜激酶,可磷酸化BAF。Mol Biol细胞。2017年8月15日;28(17):2241-2250。
- 该隐JT,金正日迪,Quast米,Shivega工作组,帕特里克RJ,莫泽C,路透社年代,佩雷斯米,迈尔斯一,魏玛JM,Roux KJ,Landsverk米.PHOX2B外显子1的无义致病变异导致先天性中枢性低通气综合征的转译再启动。我J医学热内A。173年5月,2017(5):1200 - 1207。
- 金正日迪,詹森SC,高贵的KA,KC B,Roux KH,Motamedchaboki K,Roux KJ.一种用于BioID接近标记的改进小生物素连接酶。Mol Biol细胞。2016年4月15日;27日(8):1188-96。
- 金正日迪,詹森SC,Roux KJ.用BioID识别核膜上的蛋白质-蛋白质关联。方法Mol Biol。2016; 1411:133-46。
- 被AA,安德森猕,Roux KJ.lamin相关蛋白的生物id鉴定。Enzymol方法。2016; 569:3-22。
- 对BJ,Neuharth年代,金正日迪,Amolins兆瓦,Motamedchaboki K,Roux KJ,主席PF.氧化还原和葡萄糖依赖性Txnip蛋白相互作用的鉴定。oxidmedcell longv。2016; 2016:5829063。
- 金正日迪,比兰德拉KC,朱女士,Motamedchaboki K,Doye V,Roux KJ.用邻近依赖生物素化方法探测核孔复合体结构。美国国立自然科学研究院。2014 6月17日;111(24):E2453-61。
关于BioID
BioID是一种在活细胞中筛选近似蛋白和相互作用蛋白的方法。这是通过混杂的生物素连接酶(我们称之为BirA*)与感兴趣的蛋白质(诱饵)融合来实现的,以便在活细胞中表达。添加过量的生物素可使饵料附近的内源蛋白质高效生物化。这些生物素化蛋白(称为候选蛋白)可以通过荧光显微镜或Western blot分析进行监测,并通过质谱分离进行鉴定。候选饵的生物学相关性随后可以通过各种常规方法进行验证。
认识我们的团队
常见问题
我如何让生物素在细胞培养基中进入溶液?
我们在我们的标准组织培养基(不含血清)中制作20X生物素(Sigma cat# B4639)原液(1mM),并在1X (50uM,含血清)下使用。这种20X的溶液经过过滤灭菌,在4℃下至少可以稳定几个月。
我必须诱导调节我的BioID融合蛋白的表达吗?
一般来说,没有。我们已经生成了许多稳定的细胞系,这些细胞系组成了各种BioID融合蛋白,并将这些细胞系用于大规模的BioID下拉。通过BioID调节生物素化的最有效方法是向细胞培养基中添加过量的生物素。然而,在某些情况下,诱导表达bioid融合蛋白可能是理想的和/或必要的,例如如果该蛋白是有毒的。在使用TurboID连接酶时,强烈推荐诱导调节融合蛋白的表达。
我是否需要表达大量bioid融合蛋白来识别相互作用的候选者?
根据我们的经验,没有。尽管更多的融合蛋白可以等同于更多的内源性蛋白的生物素化,但我们能够从稳定表达bioid融合蛋白的细胞中获得大量独特的生物素化蛋白(定义为那些在对照细胞的平行下拉中未检测到的蛋白质),而我们几乎无法通过免疫荧光检测到该蛋白。
BioID生物素化的有效范围是什么?
请参阅我们关于这个主题的手稿:Kim DI, KC B, Zhu W, Motamedchaboki K, Doye V, Roux KJ。用邻近依赖生物素化方法探测核孔复合体结构。美国国家科学研究院。2014 6月17日;111(24):E2453-61。Pubmed midd: 24927568
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